Nhiệt là cần thiết khi nhuộm bào tử vì nhiệt áp dụng làm gián đoạn các tế bào sinh dưỡng và làm cho malachit xanh bị rửa sạch khỏi chúng, sau đó cho phép chất cản quang xâm nhập vào tế bào. Đây là một bước bắt buộc trong một số bào tử có khả năng kháng lại các phương pháp nhuộm bào tử truyền thống.
Theo Đại học Cộng đồng Austin, nhuộm là một kỹ thuật được các nhà khoa học sử dụng để xác định các bào tử trong mẫu vi khuẩn. Một trong những bước quan trọng nhất trong nhuộm bào tử là dự đoán các đặc tính của bào tử đang được phân tích, vì một số trong số chúng có khả năng chống lại quá trình chết truyền thống. Thông thường, đây là kết quả của lớp protein cứng bên ngoài của chúng, được gọi là keratin. Đối với các nội bào tử có tính chất này, cần sử dụng kỹ thuật nhuộm nhiệt để nhuộm các bào tử bằng vết chính của chúng, màu xanh lục malachit.
Việc áp dụng nhiệt làm yếu thành tế bào và cho phép nó được rửa và thấm qua thuốc nhuộm. Tế bào ban đầu hình thành nội bào tử được gọi là tế bào sinh dưỡng. Những tế bào này nhạy cảm với nhiệt hơn chính nội bào tử, và có thể được rửa sạch và nhuộm bằng màu xanh lục malachit. Dựa trên sự trương nở và phản ứng của nội bào tử, quy trình nhuộm này sau đó có thể được sử dụng để xác định các bào tử có lớp bảo vệ, dai.
