Các giả thuyết về những gì đã xảy ra với thuộc địa Roanoke bao gồm từ những người thực dân chết vì bệnh tật cho đến bị giết bởi các bộ lạc thổ dân Mỹ địa phương. Một giả thuyết phổ biến khác là những người thực dân đã bỏ rơi Roanoke.
Những gì được biết về thuộc địa Roanoke là thuộc địa này bao gồm 17 phụ nữ, 11 trẻ em và 90 đàn ông. Sự hiện diện của phụ nữ và trẻ em ngụ ý rằng ý định đến Thế giới mới của nhóm này là để định cư và bắt đầu một cuộc sống mới ở đó, tách khỏi nước Anh.
Khi thuộc địa Roanoke được tìm thấy, không có dấu vết của những người thực dân đến định cư ở đó. Điều này dẫn đến giả thuyết đầu tiên về Roanoke.
Lý thuyết phổ biến cho rằng vì không có người thực dân nào được tìm thấy gần thuộc địa Roanoke, nên những người thuộc địa chắc chắn đã từ bỏ nó. Về nơi những người thực dân đã đi sau khi họ từ bỏ thuộc địa, các nhà nghiên cứu tin rằng những người thực dân đã đi qua Bắc Carolina, chủ yếu sử dụng Âm thanh Albemarle và sông Chowan, và gia nhập một trong nhiều bộ lạc mà họ gặp trên đường đi.
Các giả thuyết khác cho rằng những người thuộc địa đã mắc bệnh do vi khuẩn Tân Thế giới gây ra mà cơ thể họ chưa từng được tiếp xúc trước đó hoặc người Mỹ bản địa đã giết chết những người thuộc địa. Trong mọi trường hợp, các nhà nghiên cứu đồng ý rằng những người khai hoang chia rẽ và điều này cuối cùng dẫn đến sự biến mất của họ.
