Chức năng của não giữa hay còn gọi là trung não, là kiểm soát thính giác, kiểm soát vận động, thị lực, kích thích và điều chỉnh nhiệt độ của một người. Ngoài ra, não giữa cũng kiểm soát chu kỳ ngủ và thức của một người.
Não giữa hoạt động với sự hỗ trợ của tiểu não, vỏ não và não dưới. Subantia nigra, một thành phần trong trung mô, được liên kết với các con đường hệ thống vận động trong hạch nền. Não giữa nằm gần phần trung tâm của não bên dưới vỏ não và phía trên não sau. Trong vùng này, tủy sống và não kết hợp với nhau để tạo thành các chức năng khác nhau của não giữa. Đường rubospinal, kéo dài từ tiểu não đến các cảm biến chuyển động dưới cùng trong não bộ kích hoạt các chuyển động tự nguyện.
