Các mục được đề cập trong một khóa phân đôi bao gồm vi khuẩn Gram dương hay âm tính, catalase dương tính hay âm tính, có enzym nitrat và chứa enzym coagulase. Chìa khóa là một tập hợp các câu hỏi mà khi hoàn chỉnh sẽ giúp xác định được vi khuẩn. Mỗi câu hỏi yêu cầu hoàn thành một bài kiểm tra nhất định.
Xét nghiệm Gram dương hoặc Gram âm xác định xem có vi khuẩn trong mẫu hay không. Vật liệu được nhuộm màu và đưa dưới kính hiển vi để nghiên cứu. Nhuộm Gram âm thường có màu hồng và cho thấy không tìm thấy sinh vật nào. Các vết Gram dương thường có màu tím và thường có nhiều cấu trúc hơn trên phiến kính.
Xét nghiệm catalase được sử dụng để xác định tụ cầu, kết quả đọc dương tính hoặc liên cầu, kết quả âm tính. Vi khuẩn catalase dương hấp thụ oxy, trong khi vi khuẩn catalase âm tính thường kỵ khí.
Thử nghiệm nitrat reductase xác định xem vi khuẩn có tạo ra một trong hai loại enzym, nitrat reductase hoặc nitrit reductase hay không. Nguyên liệu được nuôi trong môi trường nuôi cấy có chứa nitrat kali. Nếu chất trồng chuyển sang màu đỏ và xuất hiện bong bóng trong ống Durham kèm theo thì có nghĩa là đã có nitơ.
Thử nghiệm coagulase xác định xem vi khuẩn có chứa coagulase, một loại enzyme đông máu hay không. Xét nghiệm được thực hiện bằng cách sử dụng huyết thanh trong. Nếu có mặt enzym, huyết thanh sẽ tụ lại và đặc lại.
