Một trong những yếu tố ảnh hưởng đến hoạt động của enzym là độ pH. Nếu có những thay đổi nhỏ trong độ pH, enzym sẽ bị biến tính và hoạt tính xúc tác sẽ bị mất.
Một yếu tố khác là nhiệt độ. Các phản ứng được xúc tác bởi enzyme sẽ có tốc độ tăng khi nhiệt độ tăng. Bởi vì các enzym là protein, chúng sẽ bị biến tính và trở nên không hoạt động ở nhiệt độ cao hơn.
Nồng độ của enzym cũng ảnh hưởng đến hoạt động. Nếu tăng nồng độ của enzym trong khi nồng độ của cơ chất được giữ không đổi thì tốc độ của phản ứng sẽ tăng gấp đôi khi nồng độ enzym tăng lên gấp đôi. Điều này là do nồng độ mol của enzym được sử dụng hầu như luôn luôn thấp hơn nồng độ mol của cơ chất.
