Khu định cư Jamestown ở Virginia ngày nay là khu định cư đầu tiên theo điều lệ được cấp cho Công ty Virginia bởi Vua James I. Những người định cư của Công ty Virginia đã hạ cánh trên Đảo Jamestown vào ngày 14 tháng 5 năm 1607. Khu định cư đã phát triển và cuối cùng đã tổ chức hội nghị đại diện người Anh đầu tiên ở Bắc Mỹ.
Thuyền trưởng Bartholomew Gosnold dẫn đầu những người định cư xây dựng một thuộc địa trên Đảo Jamestown vì nó nằm ở vị trí mà tàu Tây Ban Nha sẽ không thể tấn công dễ dàng; tuy nhiên, người da đỏ đã tấn công khu định cư trong vòng vài ngày sau cuộc đổ bộ. Sau khi sống sót sau cuộc tấn công, người dân bắt đầu xây dựng một pháo đài thô sơ.
Năm 1609, pháo đài bị một vụ nổ thuốc súng, khiến Đại úy John Smith, người được giao nhiệm vụ cung cấp hàng hóa từ Anh cho khu định cư bị thương. Việc định cư hầu như không thực hiện được trong mùa đông năm sau do thiếu nguồn cung cấp, các cuộc đột kích của Ấn Độ và thời tiết khắc nghiệt; chỉ có 60 người định cư sống sót vào mùa xuân năm 1610. Vào tháng 6, một con tàu từ Anh cuối cùng đã đến, mang theo nguồn cung cấp mới và một thống đốc mới, Lord De La Warr.
Ngoài ra, thuộc địa này còn được biết đến vì có liên hệ với những người Mỹ bản địa Pocahontas và cha cô là tù trưởng Powhatan. Cô kết hôn với người nông dân trồng thuốc lá John Rolfe vào năm 1614.
