Người Iroquois tin vào nhiều vị thần, vị thần quan trọng nhất là đấng tạo ra con người, thực vật, động vật và những điều tốt đẹp trên thế giới, được gọi là Thần linh vĩ đại. Mặc dù họ không tin rằng con người có thể tiếp xúc trực tiếp với những linh hồn này, nhưng họ tin rằng điều đó có thể xảy ra thông qua việc đốt thuốc lá.
Người Iroquois rất tôn kính những giấc mơ của họ, họ đã giải thích và tìm kiếm những dấu hiệu trong đó. Họ không có linh mục hoặc pháp sư toàn thời gian, mà thay vào đó họ chỉ định các chuyên gia nam và nữ bán thời gian để tiến hành các nghi lễ tôn giáo.
Người Iroquois đã chế tác "Mặt nạ giả", là những khuôn mặt được chạm khắc trên thân cây và sau đó được cắt ra, trang trí và đeo sau đó. Những chiếc mặt nạ này tượng trưng cho những linh hồn đã xuất hiện trước người thợ chạm khắc trong nghi lễ thuốc lá.
Những người đàn ông trong bộ tộc săn bắt và đánh bắt cá, xây nhà, phát quang ruộng để trồng trọt, buôn bán với người ngoài và tham gia vào bất kỳ cuộc chiến tranh nào. Những người phụ nữ làm nông, nuôi con, chuẩn bị bữa ăn, làm giỏ và các đồ dùng khác.
Nhiều phần của nền văn hóa Iroquois liên quan đến các khía cạnh mẫu hệ. Mặc dù mọi người đã kết hôn và ly hôn và đàn ông thường có nhiều vợ, nhưng khi ly hôn, con cái vẫn ở với mẹ. Quyền thừa kế cũng theo mô hình này, với tài sản sẽ thuộc về phụ nữ.
Người Iroquois không thực hành bất kỳ nghi thức thông hành chính thức nào đã biết, ngoại trừ những người nắm giữ vị trí chính trị.