Môi trường sống tự nhiên của dơi ma cà rồng là môi trường ấm áp, nhiệt đới hoặc cận nhiệt đới. Chúng có thể được tìm thấy ở độ cao lên tới 2400 mét và thường sống ở những khu vực có ánh sáng vừa phải.
Dơi ma cà rồng sống thành từng đàn khoảng 100 con, mặc dù có thể có tới 1.000 con trở lên trong một đàn. Các thuộc địa này sống trong các hang động, hốc cây, các tòa nhà bỏ hoang, hầm mỏ cũ và những nơi tối tăm khác. Chúng ngủ vào ban ngày, treo ngược trên đỉnh nơi ở của chúng, và đi săn vào ban đêm. Dơi ma cà rồng là loài động vật có vú duy nhất sống nhờ máu nóng của con mồi, thường là gia súc, ngựa hoặc các động vật nông trại khác và tấn công từ mặt đất.
