Các cơ sở chính của Mayo Clinic là ở Rochester, Minnesota; Scottsdale và Phoenix, Arizona; và Jacksonville, Florida, theo trang web của mình. Ngoài ra, Hệ thống Y tế Phòng khám Mayo có hơn 70 địa điểm bệnh viện và phòng khám ở Minnesota, Iowa, Wisconsin và Georgia.
Trọng tâm ba phần của Mayo Clinic bao gồm chăm sóc bệnh nhân, nghiên cứu khoa học và giáo dục. Tính đến tháng 12 năm 2014, hơn 1 triệu người, bao gồm cả những người từ Hoa Kỳ và hơn 100 quốc gia khác, được khám hàng năm tại Mayo Clinic. Hơn 600 bác sĩ y khoa và các nhà khoa học nghiên cứu làm việc để hướng tới các biện pháp phòng ngừa và điều trị bệnh mới, theo trang web của nó. Phòng khám Mayo cũng là một cơ sở giảng dạy bắt đầu thành lập trường y khoa của riêng mình vào năm 1972.